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PCR实验室的污染及处理污染措施
2019/06/27 08:43
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【摘要】：
荧光PCR的污染分为实验前的污染和实验进行中的污染。实验前的污染是指实验材料的污染，主要是病人标本来源的核酸；而实验进行中的污染，通常实验过程中的每一步骤都可能发生对样本的污染。
核酸的制备是较常产生污染的过程，荧光PCR反应进行过程中所涉及到的实验设备的任何部位，也是可能的污染源。而 PCR产物是个高度危险的污染源，通常的阳性PCR产物含有大量的目标模板分子，极易泄露产生气溶胶污染整个实验室。
在日常工作中需要加强对污染的监测，每次PCR实验务必做各种阴阳性对照。①阳性对照：阳性对照要选择扩增度中等、重复性好的模板进行，监测PCR反应是否成功且是否合乎理论要求。②标本对照：被检测的标本是血清就用鉴定后的正常血清作对照。③试剂对照：在PCR试剂中不加模板DNA或RNA，进行PCR扩增，以监测试剂及环境是否污染。有时轻微的气溶胶污染还需要复管试验、重复性试验等。
所以PCR实验室所有人员应充分认识预防污染的重要性，了解产生污染的原因，如：①标本间交叉污染。在核酸提取过 程中一定要小心操作，防止飞溅，做好标记，避免样本间的交叉污染。配好反应液并加入待测核酸后，须盖好反应管，要有明确的样品处理程序。②PCR试剂的污染。主要是由于在PCR试剂的配置过程中加样枪、容器、双蒸水及其他溶液被PCR核酸模板污染。③PCR扩增产物污染。主要是气溶胶污染 ，一定要选用质量好的离心管和反应管，避免试剂飞溅、外泄。同时要有高度的责任感，反应完毕后应及时把反应物清理掉，避免荧光PCR后的产物反应管在工作区内打开。
要避免污染，首先应是预防而不是排除污染。实验室工作区的严格划分的目的就是为了预防污染，工作区之间传递窗的设置，一方面方便了试剂、样品等在不同实验室区间的传递；另一方面也增加了交叉污染的危险，因此要定期对传递窗进行处理或用移动紫外灯照射。工作结束后必须对工作区进行清洁，用10%次氯酸钠擦拭，再用70%乙醇擦拭，然后再用可移动紫外灯调至实验台上60～90cm内过夜照射，可有效打断扩增产物。一旦污染发生，应立即进行清洁卫生、稀盐酸液擦拭或浸泡、通风疏散、紫外灯照射、酸雾处理等措施，尽快消除污染。也可选用不同区域的引物进行PCR扩增，尽快恢复正常工作状态。造成荧光PCR污染的原因很多也较复杂的，因此对荧光PCR实验室进行严格的科学管理。
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