临床PCR实验室中引起假阳性和假阴性的有关因素

2019/06/13 08:39

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【摘要】：

与试剂盒设计制造有关的因素试剂盒中引物的选择, 反应过程中诸如镁离子浓度、PH、温度、循环周期各阶段的时间与循环次数等都可对扩增过程中的敏感性、特异性产生极大的影响

与试剂盒设计制造有关的因素试剂盒中引物的选择, 反应过程中诸如镁离子浓度、PH、温度、循环周期各阶段的时间与循环次数等都可对扩增过程中的敏感性、特异性产生极大的影响, 如通过高温变性解链的DNA单链在50℃左右可与体系中存在的引物寡核苷酸片段结合，这一个温度是折衷的选择,若温度更低（如37℃）扩增, 效率可进一步提高, 但引物与模板间的错配现象增多, 可致非特异性扩增, 提高温度可使反应的特异性增强, 但总的反应效率下降。

DNA扩增仪的影响扩增仪主要的性能指标是其反应温度的准确性和温度分布的均匀性。反应,尤其是随机引物PCR对于反应环境的微小变化（如温度）极为敏感, 可因此直接影响反应结果的重复性。一般地扩增仪加热块中位于中间部位的样品反应井的温度较周边井的更为恒定。另外, 扩增仪工作过程中温度变化所需要的时间也是影响反应结果的一个因素。如仪器升温或降温所需时间与试剂盒所要求的时间差异较大时, 则可能影响反应结果。

关键词：

洁净实验室设计的特点

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