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PCR实验室扩增产物分析的管理与质控
2019/06/12 08:52
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【摘要】：
目前常用的扩增产物分析方法有琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、膜探针杂交方法（非同位素标记）和核酸测序方法。扩增产物在电泳鉴定前，先于核酸定量仪上进行DNA含量测定并作好记录，一般A260/A280比值1.8-2.0，证明扩增产物质量较为理想，同时根据DNA的浓度将各扩增产物调整至同一总量，保证电泳上样量一致和结果的客观性。
膜上斑点印迹杂交时，阳性和阴性质控应与样本同时进行检测分析，所有实验条件保持一致，防止人为误差。由于产物分析区内所用的试剂如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛具有相当毒性，实验人员操作时佩戴一次性口罩帽子及手套、做好安全防护。扩增产物因处理不当产生的气溶胶扩散也是 PCR实验室污染的原因之一，因此对检测过程中废弃的溶液及吸头等物品应统一收集至1mol/L HCL中或用于生物污染物处理的垃圾袋内按相关程序处理。
综上所述，PCR实验室面临的首要任务是避免假阳性和假阴性结果的产生。做好试剂、仪器、样本、核酸扩增检测过程的质量控制是防止污染的有效手段。由于病理科的样本与常规临床样本不同、大多为石蜡组织，处理方法有其特殊性。特别是一些陈旧蜡块组织，常由贮存条件、试剂纯度、制备方法等因素导致提取的DNA质量差及基因扩增失败。组织中的基因组为大分子量DNA呈双链线性结构，特点长而弯曲，极易受到机械剪切力的损伤，所以不论从组织的固定、脱水、包埋，还是后期核酸的提取过程都要避免因此而产生的DNA质量下降。
即使目前已有不少针对性的改良方法被采用，可还是因为缺少统一的标准，不同的实验室检出的结果并不一致。因而，建立完整的SOP更是PCR实验室质量控制的重中之重，使实验人员操作时有章可循，确保了检测结果的稳定性及准确性。临床样本采集、运送和保存、样本制备处理和核酸提取方法、检测试剂和检测方法以及检测结果分析的标准化在临床应用中能有效减少在同一实验室不同检测批次间或不同实验室对同一标本检测结果间的差异。此外，加强室间质量评价工作也是保证检测结果可比性和准确性的重要质控手段。
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