PCR实验室污染与控制措施

2019/05/16 08:44

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【摘要】：

所有配制PCR试剂使用的水应该是新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm滤膜过滤的,并且经高压灭菌,储存过久的水应避免使用,认为购买的蒸馏水是干净的观点是错误的。纯水的制备应在没有DNA污染的其他实验室进行,如化学实验室等。

1.保证高质量的实验用水

所有配制PCR试剂使用的水应该是新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm滤膜过滤的,并且经高压灭菌,储存过久的水应避免使用,认为购买的蒸馏水是干净的观点是错误的。纯水的制备应在没有DNA污染的其他实验室进行,如化学实验室等。如果实验室用水或纯水机被污染,则对整个实验是致命的。

2.手套的使用

在配制试剂、操作样品、建立反应和检测扩增产物的全部过程中,都要戴手套并勤于更换,以避免核酸和核酸酶的污染。

3.正确的试剂配制与贮存

使用的试剂应是“分析纯”以上、正规厂家生产和从正规渠道购买的,以避免重金属离子、核酸酶和其它非特异污染物的引入。所有的试剂应以大体积、高浓度来配制,然后稀释和分装成仅够一次使用的量进行贮存,以保证实验的连续性和避免污染。

4.加样器的妥善保管

应准备多支加样器以用于不同的PCR的操作,虽然这样会增加成本投入,但却是减少污染的有效办法；样品准备区和前区使用的加样器在不使用时,将其保存在密封袋中是防止加样器污染的一种有效方法。

5.设立对照

应设立阳性、弱阳性和阴性对照。使用阳性对照时,应严格避免由对照引起的污染；使用弱阳性对照的目的是验证各种反应缓冲液中含扩增抑制物；阴性对照则要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品和产物的污染,阴性对照应包括除模板以外的所有试剂。

6.器材的处理

所有试剂和样品准备过程中都使用1次性灭菌的瓶子和管子。一些较贵重的需要复利用的器材,如玻璃器皿,须经强酸处理后,再经170℃,2h的干烤处理。某些认为125℃高压处理能够破坏模板DNA的想法和做法是不可靠的。

7.风淋的使用

如果把组织培养或微生物操作的标准无菌技术用于PCR,如风淋的使用,则污染的风险将大大降低,但这无疑要大大增加成本的投入。

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