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PCR实验室污染的来源及控制方式
2019/05/15 08:43
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【摘要】：
PCR可从痕量的DNA扩增出大量的产物,使得PCR特别容易受到污染,主要是由于操作时产生气溶胶而引起的。污染的可能有3个来源：一是来自其它测试样品的DNA；二是来自试验材料如重组克隆的DNA；三是来自同一靶序列前一次PCR的扩增产物,这种污染通常称为“遗留”污染,是较为麻烦的一种。下面为大家介绍一下控制污染的方法。
1.分区控制污染
把PCR实验室的各部分在区域上分为样品制备、前PCR区和后PCR区。在不同的地点进行的目的是为了避免污染,即旧的PCR产物在对新的PCR分析的污染、分子克隆的污染和样品与样品之间的污染。
将过程的各部分在区域上分开需要额外的空间、资金和设备,但这一方法应该是任何污染控制策略的核心部分,须进行资金等投入。
2.UNG控制污染
使用尿嘧啶DNA-糖苷酶（UNG）,并用脱氧尿苷三磷酸（dUTP）代替脱氧胸苷三磷酸（dUTP）。其做法是将所有的扩增反应与UNG酶进行预反应,可以去除残留在DNA中的dU，产生数十或数百的无碱基位点,DNA聚合酶会在这些位点处停滞。而且这些位点是不稳定的,在热循环中会发生断裂,每一种损伤都会防止重扩增的发生。产物越长,UNG去污染的效率就越高,但对短于100bp的产物不能用UNG完全消除污染。
3.紫外线控制污染
用紫外线使干燥的DNA失活以减少器材表面模板DNA污染的手段, 机理是通过在相邻的嘧啶碱基之间形成环丁烷而造成DNA损伤,环丁烷环形成链内的嘧啶二聚体,从而抑制了聚合酶介导的链延伸反应。其缺陷是不能消除所有污染,而只能将污染降低几个数量级,并且当DNA片断小于300bp时效果较差。另外象加样器、离心机等器材只有一小部分是向着光源的,这样就不能被紫外线有效地去除污染。因而,紫外线照射仅可以为保持PCR实验室没有污染提供额外的安全保障。
4.化学加合物控制污染
用化学加合物,如用异补骨脂素将单链或双链DNA衍生化,这些加合物可防止污染的DNA作为反应的底物。
关键词：
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PCR实验室前区后区的要求
PCR实验室的环境要求
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